NOVENO REPORTE DE ARTICULO CIENTIFICO

La exposición del etanol disminuye la permeabilidad de la membrana externa mitocondrial en hepatocitos de rata en cultivo

Metabolismo mitocondrial depende del movimiento de los metabolitos hidrofílicos a través de la membrana mitocondrial externa a través del canal de aniones dependiente de voltaje (VDAC). Se evaluó la permeabilidad de la mitocondria VDAC intracelular en hepatocitos cultivados después de la permeabilización de la membrana plasmática con 8 digitonina IM. El bloqueo de VDAC con polianión Koenig inhibido desacoplada y ADP estimulada por la respiración de los hepatocitos permeabilizadas en un 33% y 41%, respectivamente. La exposición aguda de etanol también se redujo la respiración y la accesibilidad de la adenilato quinasa mitocondrial (AK) de las membranas de los hepatocitos permeabilizadas en un 40% y 32%, respectivamente. La permeabilidad de la membrana externa se evaluó de forma independiente por microscopía confocal de atrapamiento de dextrano kDa 3 tetrametilrodamina conjugado (RhoDex) en las mitocondrias de los hepatocitos mecánicamente permeabilizadas. El etanol disminuyó RhoDex trampa en la mitocondria en un 35% de la observada en las células control. En general, estos resultados demuestran que la exposición aguda de etanol disminuye la permeabilidad de la membrana mitocondrial externa más probable por la inhibición de VDAC.

Las respuestas agudas del hígado al etanol incluyen la generación de ATP mitocondrial en peligro, el aumento de formación de especies reactivas del oxígeno (ROS) 1, la peroxidación lipídica y la supresión de la oxidación de ácidos grasos. El etanol también produce un estado hipermetabólico caracterizado por un rápido incremento en el metabolismo del alcohol (SIAM), una casi duplicación de la respiración mitocondrial y un desacoplamiento aparente de la fosforilación oxidativa mitocondrial. El metabolismo mitocondrial requiere el continuo intercambio de sustratos entre el citosol y la matriz mitocondrial.

 
Por el contrario, el intercambio de casi todos los metabolitos solubles en agua entre el citosol y el espacio intermembrana es ampliamente aceptado que se produzca principalmente a través del canal de aniones dependiente de voltaje (VDAC) de la membrana externa mitocondrial. Otros tipos de canales grandes también se describen en la membrana mitocondrial externa, pero estos canales no VDAC permanecen cerrados, excepto cuando se abre por la pro-apoptóticos y de señalización en o están dedicados a funciones específicas, como la importación de proteínas.

Recientemente, hemos propuesto que el cierre VDAC podría explicar, al menos en parte, la supresión de la generación de ATP mitocondrial y la oxidación de ácidos grasos después de etanol. Ponemos a prueba esta hipótesis para mostrar que los cambios en las características bioquímicas y la permeabilidad de las mitocondrias de los hepatocitos en ratas expuestas a una dosis única de etanol son consistentes con la disminución de la permeabilidad de VDAC y permeabilidad restringida de la membrana externa de hidrófilo metabolitos mitocondriales.

Se utilizó para permeabilize el plasma y las membranas mitocondriales externa de los hepatocitos de rata. Hepatocitos aislados intactos fueron suspendidas en tampón intracelular (ICB) y tratados con 00-80 digitonina IM. etiquetado tripán azul y la liberación de LDH aumentó de forma dosis-dependiente. Tripan azul etiquetado se produjo un poco más rápidamente que la liberación de LDH, lo que sugiere que el tamaño de digitonina inducida por los poros en la membrana plasmática aumenta progresivamente con el aumento de la concentración.

Adenilato quinasa (AK) está presente tanto en el espacio intermembrana citosol y las mitocondrias de los hepatocitos. Debido a las diferencias en el peso molecular y la conjugación con los componentes citosólicos, citosólica AK puede ser puesto en libertad poco antes de la LDH en cinco digitonina.
Del mismo modo, la absorción de azul de tripano también se produce antes. En 10 a 20 digitonina IM, el 90% de LDH fue puesto en libertad después de 10 digitonina IM mientras que la liberación AK estancado y 50 años en%. Dado que aproximadamente la mitad de la adenilato quinasa es en el espacio intermembrana mitocondrial, estos resultados indican que la LDH citosólica y citosólica (mitocondrial no) AK se liberan a la concentración digitonina mismo.